Часто задаваемые вопросы

Технические часто задаваемые вопросы (FAQs)

Общие технические вопросы, на которые отвечает наша команда технической поддержки

A. Могу ли я получить бесплатный образец продукта?

Мы не предлагаем бесплатные или пробные образцы для тестирования. Наша политика заключается в том, что если антитело не работает, как указано в техническом описании, мы предложим замену или возмещение. Если антитело используется в непроверенном виде или приложении, мы не можем предложить замену или возмещение.

B. Как выбрать подходящее вторичное антитело?

Вторичные антитела должны быть получены против видов хозяев как первичное антитело, которое вы используете. Например, если ваш первичный моноклональный мышь, вам потребуется вторичный анти-мышиный.

C. Как выбрать контроль изотипа?

Контроли изотипа используются для подтверждения того, что первичное связывание антитела является специфическим, а не результатом неспецифического связывания с Fc-рецептором или других взаимодействий белка. Антитело контроля изотипа должно соответствовать первичным видам антител хозяина, изотипу и конъюгации. Например, если первичное антитело представляет собой FITC-конъюгированный мышиный IgG1, то вам нужно будет выбрать FITC-конъюгированный мышиный IgG1 для контроля изотипа.

D. Как мне выбрать положительный контроль?

Вы можете выполнить быстрый поиск литературы в PubMed, чтобы увидеть, какие ткани и клетки экспрессируют белок, представляющий интерес.

E. Как я должен аликвоту моего антитела?

Размер аликвот будет зависеть от того, сколько обычно используется в эксперименте. Аликвоты должны быть не менее 10; чем меньше аликвота, тем больше на концентрацию исходного вещества влияют испарение и адсорбция антитела на поверхность флакона для хранения.

F. Как я могу определить, может ли антитело обнаруживаться у непроверенного вида?

CUSABIO не могут гарантировать, что антитело будет работать в непроверенных видах, даже если выравнивание последовательности высокое. Существует много переменных, участвующих в определении того, будет ли антитело связываться с другим видом.
Если нет доступных альтернатив, и вам необходимо рассмотреть вопрос о приобретении антитела для использования у видов, которые не были протестированы, мы рекомендуем проверить выравнивание последовательности иммуногена с интересующим вас белком.

G. Будет ли это антитело перекрестно реагировать с другой изоформой этого белка или белка из того же «семейства»?

Мы рекомендуем проверить выравнивание последовательности иммуногена с изоформами или другими интересующими вас белками. Существует несколько веб-сайтов, которые предоставляют инструмент для расчета процентного выравнивания.
Возьмите копию последовательности иммуногена антитела и выровняйте ее с последовательностью белка того вида, который вы хотели бы проверить. Мы рекомендуем оценку выравнивания более 85%, что является хорошим показателем того, что антитело может перекрестно реагировать. Поэтому мы бы рекомендовали, чтобы процентное выравнивание было намного ниже, чтобы это указывало на отсутствие перекрестной реактивности.

H. Почему фактический размер полосы вестерн-блоттинга отличается от прогнозируемого?

Вестерн-блоттинг – это метод, который разделяет белки по размеру. Как правило, чем меньше белок, тем быстрее он мигрирует через гель. Однако на миграцию влияют и другие факторы, поэтому фактический наблюдаемый размер полосы может отличаться от прогнозируемого. Общие факторы включают в себя:
Посттрансляционная модификация – например, фосфорилирование, гликозилирование и т. д., что увеличивает размер белка
Расщепление после перевода – например, многие белки синтезируются как про-белки, а затем расщепляются, давая активную форму, например, про-каспазы
Варианты сплайсинга – альтернативный сплайсинг может создавать белки разных размеров, полученные из одного и того же гена
Относительный заряд – состав аминокислот (заряженный против незаряженного)
Мультимеры – например димеризация белка. Это обычно предотвращается в восстановительных условиях, хотя сильные взаимодействия могут привести к появлению более высоких полос