Описание
Инструкции по применению набора для иммуноферментного анализа (ELISA) на хлорпирифос (CPF)
Этот набор предназначен только для исследовательских целей.
1 Цель использования:
Этот набор используется для количественного определения остатков хлорпирифоса (CPF) в кормах, рыбе, креветках и мясных тканях (таких как курица, говядина и свинина), яйцах, меде, молоке, сыворотке и образцах мочи.
2 Принцип эксперимента
В этом наборе используется конкурентный метод ELISA. Планшет для микротитрования покрывается антигеном, связанным с хлорпирифосом (CPF), и добавляются стандарты или образцы хлорпирифоса (CPF), свободный хлорпирифос (CPF) и хлорпирифос (CPF) предварительно наносится на микротитровальную полоску. маркеры ферментов антител -хлорпирифос (CPF). Используйте субстрат TMB для проявления цвета. После добавления стоп-раствора цвет меняется с синего на желтый. Используйте считыватель микропланшетов для обнаружения при длине волны 450 нм. Поглощение такое же, как у образца. Содержание хлорпирифоса (CPF) обратно пропорционально, и содержание хлорпирифоса (CPF) в образце рассчитывается по стандартной кривой.
3 Состав комплекта
3.1 Съемный планшет для ELISA с предварительно нанесенным покрытием на хлорпирифос (CPF) с конъюгированным антигеном: 1 кусок (12 лунок × 8 полосок).
3.2 Стандарт хлорпирифоса (CPF): 6 бутылок (1 мл / флакон), содержание: 0 частей на миллиард, 0,1 частей на миллиард, 0,3 частей на миллиард, 0,9 частей на миллиард, 2,7 частей на миллиард, 8,1 частей на миллиард.
3.3 Ферментный конъюгат анти-хлорпирифос (CPF) антитело: 1 флакон (6 мл).
3.4 Проявитель цвета A: 1 флакон (6 мл).
3.5 Цветная проявляющая жидкость B: 1 флакон (6 мл).
3.6 Стоп-раствор: 1 флакон (6 мл), 2M серная кислота.
3.7 Разбавитель образца: 1 флакон (10 ×, 6 мл), используемый для разбавления образца.
3.8 Концентрированная промывочная жидкость: 1 флакон (20 × 20 мл), используемый для промывки планшетов.
3.9 Один лист с инструкциями.
4 Необходимые, но не предоставленные материалы
4.1 Оборудование
4.1.1 Считыватель микропланшетов с длиной волны 450 нм.
4.1.2 Дробилка.
4.1.3 Измерительный цилиндр.
4.1.4 Осциллятор.
4.1.5 Воронка.
4.1.6 Ватман № 1 или эквивалентная фильтровальная бумага. 4.1.7 Микропипетка.
4.2 Реагенты
4.2.1 Деионизированная вода или дистиллированная вода.
4.2.2 Метанол.
5 хранения
5.1 Набор хранится при 2 ~ 8 ℃, не замораживать
5.2 Неиспользованные микропланшеты следует запечатать и хранить в сухом виде.
6 вопросов, требующих внимания
6.1 Пожалуйста, внимательно прочтите инструкции перед использованием набора.
6.2 Не используйте наборы с истекшим сроком годности.
6.3 Перед использованием набора доведите реагенты до комнатной температуры (25 ± 2 ° C). Рекомендуется возвращать к температуре не менее 2 часов.
6.4 Стандартный продукт содержит хлорпирифос (ХПФ), поэтому при его использовании следует соблюдать особую осторожность и носить перчатки во время работы.
6.5 Стоп-раствор содержит серную кислоту, которая предотвращает ожоги кожи и коррозию одежды во время использования.
6.6 Советы для разных стандартов и образцов нельзя смешивать, иначе это повлияет на результаты испытаний.
6.7 Не допускается смешивание реагентов в наборах с разными номерами партий; Наконечники, используемые для разных стандартов и образцов, нельзя смешивать, иначе это повлияет на результаты экспериментов.
6.8 Разбавитель образца из этого набора должен использоваться при разбавлении образца, в противном случае это повлияет на результаты эксперимента.
6.9 При смешивании реагентов следует избегать вспенивания.
7 Приготовление рабочей жидкости
7.1 Стандартный раствор хлорпирифоса (CPF): 0 частей на миллиард, 0,1 частей на миллиард, 0,3 частей на миллиард, 0,9 частей на миллиард, 2,7 частей на миллиард, 8,1 частей на миллиард
7.2 Концентрированная промывочная жидкость: разбавить 1:20 (1 + 19) дистиллированной водой для использования.
7.3 Разбавитель пробы: разбавить 1:10 (1 + 9) дистиллированной водой для использования.
7.3 Хромогенный агент: зарезервирован, избегать попадания прямого света
7.4 Раствор для остановки реакции: готов к использованию
8 Процедуры обработки образцов (образцы должны использоваться строго в соответствии с инструкциями во время процесса экстракции, а процесс экстракции должен быть точно разбавлен, иначе результаты будут неточными, образцы должны храниться в прохладном и темном месте и в холодильнике)
8.1 Взять 10 г измельченного образца и добавить 20 мл 70% раствора метанола.
8.2 Энергично вибрируйте в течение 3 минут.
8.3 Фильтр с фильтровальной бумагой Whatman No 1
8.4 Возьмите 25 мкл обработанного образца и добавьте 25 мкл разбавителя образца в реакционную лунку (коэффициент разбавления образца равен 2).
9 этапов иммуноферментного анализа
9.1 Экспериментальные инструкции
9.1.1 Пожалуйста, полностью восстановите все реагенты вне коробки до комнатной температуры (25 ± 2 ° C) перед началом эксперимента в течение примерно 2 часов. После нагревания до комнатной температуры (25 ± 2 ℃) выньте микропористые полоски, закройте лишние микропористые полоски и сразу же храните их при 2 ~ 8 ℃.
Примечание. Убедитесь, что возврат температуры достаточен, в противном случае это повлияет на точность определения.
9.1.2 Сразу после использования поместите реагент на хранение при 2 ~ 8 ℃.
9.1.3 Пожалуйста, не меняйте программу анализа
9.1.4 Используйте точную микропипетку.
9.1.5 После запуска операции не прерывайте никакую программу.
9.1.6 Воспроизводимость результатов ELISA во многом зависит от рабочих процедур, пожалуйста, действуйте строго в соответствии с требованиями.
9.1.7 Во избежание перекрестного загрязнения каждый стандарт
и образец должен быть заполнен разными наконечниками
9.1.8 Не позволяйте кончику пипетки касаться раствора или внутренней поверхности микролунки при добавлении образцов.
9.2 Этапы анализа
9.2.1 Предварительная нумерация, маркировка положения B0, стандартов и образцов, рекомендуется проводить обнаружение двойных отверстий.
9.2.2 Возьмите необходимое количество микропор (полоски с микропорами можно удалить), повторно запечатайте лишние полоски и немедленно поместите их обратно при 2 ~ 8 ℃ для хранения.
9.2.3 Раствор для разбавления образца (10х), концентрированный промывочный раствор (20х) разбавляют рабочим раствором (разбавленным дистиллированной или деионизированной водой).
9.2.4 Добавьте 50 мкл стандартного раствора 0,0 ppb в лунку B0.
9.2.5 Добавьте 50 мкл стандартного раствора в каждую стандартную лунку.
9.2.6 Добавьте 50 мкл раствора образца в каждую лунку для образца.
9.2.7 Добавить 50 мкл ферментного конъюгата антитело против хлорпирифоса (CPF) во все лунки.
9.2.8 Осторожно встряхните реакционный планшет в течение нескольких секунд.
Теплая ванна 9,337 ℃ в течение 30 минут (время от времени постукивая по реакционной пластине во время теплой ванны, можно уменьшить ошибку двойного отверстия)
9.3.1 Стряхните жидкость в лунках, промойте микролуночный планшет 5 раз лосьоном и постучите по впитывающей бумаге в последний раз, чтобы полностью удалить жидкость из лунок.
9.4 Реакция
9.4.1 После завершения процедуры промывки немедленно используйте микропипетку для добавления 50 мкл хромогенного раствора A, а затем 50 мкл хромогенного раствора B в каждую микролунку; слегка встряхните реакционную пластину, чтобы тщательно перемешать
9.4.237 ℃ теплая ванна в течение 10 минут
9.4.3 Добавьте 50 мкл стоп-раствора в каждую лунку и хорошо перемешайте.
9.4.4 Определяют оптическую плотность при 450 нм и считывают результат в течение 5 минут.
10 Расчет результата
10.1 Количественный анализ
10.1.1 Среднее значение (B) значения поглощения каждого стандартного раствора концентрации и полученного образца делится на значение поглощения (B0) первого стандарта (0 стандарта), а затем умножается на 100%, что представляет собой поглощение в процентах. значение.
B – среднее значение поглощения стандартного раствора или раствора образца. B0 – среднее значение поглощения стандартного раствора 0 мкг / л.
10.1.2 Используя логарифмическое значение концентрации хлорпирифоса (CPF) по оси X и значение поглощения в процентах по оси Y, начертите стандартную кривую. В соответствии с процентным значением поглощения образца абсцисса соответствующей точки может быть получена из кривой, которая представляет собой логарифм концентрации хлорпирифоса (CPF), а антилогарифм рассчитывается как концентрация C (частей на миллиард) хлорпирифоса. (CPF) в тестовом растворе.
10.1.3 Поскольку образец был предварительно разбавлен, концентрацию образца, полученную по стандартной кривой, необходимо умножить на его коэффициент разбавления.
10.2 Полуколичественное определение
10.1.1 Визуальное полуколичественное определение: сначала выберите подходящий стандартный раствор и прогоните его с образцом, и на основании сравнения значений оптической плотности исследуемых образцов определите, больше или меньше значение концентрации образца. образец и стандарт.
10.1.2 Полуколичественное измерение прибора: сначала выберите соответствующий стандартный раствор и проведите его с образцом, и на основании сравнения цвета образца определите, является ли значение концентрации образца меньше или больше стандартного значения. и стандарт.
11 специфичность
Перекрестная реакция вещества
Хлорпирифос (CPF) 100%
12 Параметры комплекта
Нижний предел обнаружения этого набора – 0,05ppb. Наилучшее значение абсорбции B0 должно быть больше 1,0.
Погрешность в планшете набора для оптической плотности составляет менее 8%, а ошибка между планшетами – менее 15%. Показатель восстановления при использовании метода извлечения образца ткани, описанного в этом руководстве, превышает 80%. 13
Стандартный диапазон кривой, предоставляемый комплектом, составляет 0,1ppb ~ 8,1ppb.
14 Ограничения анализа
Положительные образцы, полученные с помощью этого набора, должны быть подтверждены другим методом, таким как ВЭЖХ или ГХ / МС.
